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PEI线性转染试剂的具体操作流程是怎样的

 更新时间:2022-06-26 点击量:780
 
  PEI线性转染试剂是由一种阳离子聚合物转染试剂,分子量40000,它能与核酸形成复合物,并使该复合物进入哺乳动物细胞。线性PEI转染试剂广泛适。该试剂可在含血清与抗生素的*培养基中发挥作用,即使在有血清存在的情况下,它仍然能高效的将核酸导入细胞。实验操作简单,对大多数培养细胞都有较高的转染效率(用于常见细胞系,如HEK-293、HEK293T、HepG2、Hela、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3和Sf9等),并且细胞毒性较低。
  PEI线性转染试剂的操作流程:
  1、细胞铺板
  提前一天将细胞种植在六孔板中,以转染时细胞密度在70%~80%为宜。
  2、转染过程
  (1)在转染前2h,移除细胞上原有的培养基,换为新鲜的*培养基。
  (2)将2ug质粒DNA用50uL无血清稀释液稀释,充分混匀制成DNA稀释液。
  注意:无血清稀释液建议采用Opti-MEM或ddH2O
  (3)向DNA稀释液中直接加入4uL转染试剂,室温静置10~15min。转染复合物配制完成。
  (4)将转染复合物加入细胞培养基中,轻柔混匀。
  (5)继续培养24~48h,收取细胞进行鉴定或加入相应抗生素筛选稳定克隆。
  (6)使用本产品转染后一般在24h开始进入表达高峰期,36~48h达到表达高峰,相对于脂
  质体转染试刘,达到峰值的时间延后约6~12h。
  PEI线性转染试剂的注意事项:
  1)本产品对细胞非常温和,一般情况下转染后无需进行换液操作。
  2)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。