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以下便是PEI转染试剂的转染步骤所在

 更新时间:2022-11-27 点击量:793
 
  PEI转染试剂是以一种阳离子高分子聚合物-聚乙烯亚胺(polyethylenimine,PEI)为载体的基因转染试剂。PEI是在pH中性溶液中具有*正电荷密度的合成聚合物。带正电的PEI与带负电的DNA牢固结合,并赋予净阳离子电荷,使DNA进入细胞。PEIPrime是一种高性能转染试剂,利用PEI的特性旨在实现高产量,可重复性和可扩展的瞬时基因表达。
  PEI转染试剂能够高效率转染多种细胞系,包括贴壁细胞和悬浮细胞。此外,PEI是用于HEK293和CHO悬浮细胞转染的试剂。PEI转染试剂是生产任何具有成本效益的生物制剂的合适选择,包括重组蛋白,抗体和病毒。它能够高效率转染多种细胞系,包括贴壁细胞和悬浮细胞,具有较高的转染效率,尤其对于悬浮细胞(如293-F、CHO-S等)表现出的性能,同时也具有低毒、高效、操作简单等特性,也可用于Invivo动物体内的高效转染。
  PEI因其高效和低毒的性能,可广泛用于哺乳动物的蛋白表达。实验表明,转染的细胞蛋白表达水平远远高于其他转染试剂,适合重组蛋白的大规模生产。
  PEI转染试剂的转染步骤:
  -以HEK293贴壁细胞为例,步骤如下:
  1、细胞接种:细胞密度2-6x106cells/mL。
  2、质粒的准备:在5%最终培养体积的DMEM或培养基中,每106个细胞稀释1.0ugpDNA。
  3、PEI的准备:在5%最终培养体积的DMEM或培养基中,每106个细胞稀释3.0ugPEIPrime,混匀。
  4、通过快速,短暂涡旋或颠倒数次试管,将pDNA和PEIPrime溶液混合在一起。
  5、使pDNA和PEI的混合物在室温下静置10分钟。
  6、一边旋转板,一边将pDNA和PEI混合物逐渐滴加到细胞中。
  7、于37℃CO2培养箱中培养。