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细胞冻存有何注意事项?

 更新时间:2023-09-11 点击量:451

细胞低温冻存是培养室常用技术。原理是将细胞放在-196℃液氮中,可以使细胞暂时脱离生长状态,减少细胞代谢,理论上储存时间几乎是无限的。那么细胞冻存有何注意事项呢?让我们一起来看看吧!

一、DMS0稀释时会释放大量热量,不能直接加到细胞液中,须事先配制,且DMSO必须是细胞培养级别的;

二、缓慢冷冻,细胞逐步脱水,不会因产生大的冰晶而受到损害;

三、选择细胞生长良好、密度约为80-90%、活力达90%以上的细胞冻存;

四、冻存时细胞密度少于5X105个活细胞/mL时,很难成功复苏;

五、细胞不可长期保存在-80°C冰箱中。我们建议在-80°C冰箱中的保存时间不要超过48h,放入液氮中保存;

六、冻存细胞操作时应戴防护眼镜和手套,以免液氮冻伤;

七、冻存管的盖子一定要拧紧,否则复苏水浴时会渗水,造成支原体污染;

八、定期检查液氮储备,保证细胞全部浸在液面下;

九、冻存细胞时在每支冻存管都标上细胞的名称,冻存时间,并记录在册,避免取错细胞,找不到冻存管等情况;

十、细胞在冷冻过程中在-20C冰箱内放置时间不可超过1小时,以防止冰晶过大而破坏细胞。

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