Phos-tag™ 是一种能与磷酸离子特异性结合的功能分子,可与蛋白上的磷酸基团结合。在SDS-PAGE中,在有二价金属离子(Mn2+/Zn2+)参与的条件下,磷酸化蛋白与Phos-tag™ 结合,电泳迁移速度变慢,从而与非磷酸化蛋白分离。
Wako的SuperSep™ Phos-tag™ 是一种即开即用型的预制胶,含有50 μmol/L的Phos-tag™ 丙烯酰胺,含有Zn2+ 作为金属离子,保存稳定性长达半年,得到的条带整齐。多种规格型号,适合Bio-rad/Life Technolofies/EasySeperator等多种电泳仪。全批次均经过严格检验,保证能分离磷酸化与非磷酸化条带。
应用实例:
1. β-casein
使用Tris-甘氨酸(TG),Tris-Tricine(TT)或Tris-MOPS(TM)三种不同runningbuffer比较β-casein在SuperSepTMPhos-tagTM预制胶中磷酸化蛋白的迁移率。
2. 鼠脑来源Dnmt1磷酸化实验
从鼠脑提取液中纯化得到GST-Dnmt1(1-290)结合蛋白,作为体外激酶实验的反应底物,在SuperSep™ Phos-tag™ 预制胶中检测到了激酶的存在。
3. 二维电泳分析hnRNP K磷酸化异构体
小鼠巨噬细胞J774.1 经LPS 刺激后,裂解细胞,经过免疫沉淀法分离得到hnRNP K。在二维电泳中,一维是IPG 胶,二维是SuperSep™ Phos-tag™ 预制胶,可分离hnRNP K 的异构体。利用质谱仪确认不同的点代表不同的亚型或修饰蛋白。
北京百奥创新科技有限公司重点推介Wako预制胶SuperSep™ Phos-tag™(195-17991/198-17981),欢迎选购!