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Elabscience叶酸/维生素B9(FA/VB9)ELISA试剂盒怎么用?

 更新时间:2023-12-28 点击量:359

Elabscience叶酸/维生素B9(FA/VB9)ELISA试剂盒用于体外定量检测血清、血浆或其它相关生物液体中FA/VB9浓度。那么你知道Elabscience叶酸/维生素B9(FA/VB9)ELISA试剂盒怎么用吗?让我们一起来看看吧!

一、检测前准备工作

1. 提前20分钟从冰箱中取出试剂盒,平衡至室温(18-25℃)。如果试剂盒需分 多次使用,请仅取出本次实验所需的酶标板条和试剂,剩余板条和试剂需 按照zhi定条件保存。

2. 洗涤液:将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:24)。提示:从冰箱中取出的浓缩洗 涤液可能有结晶,属于正常现象,可用40℃水浴微加热使结晶wan全溶解后 再配制洗涤液。当日使用。

3. 标准品工作液:将标准品于10000×g离心1分钟,加入标准品&样品稀释液1 mL至冻干标准品中,旋紧管盖,静置10分钟,上下颠倒数次,待其充分溶解后,轻轻混匀,避免起泡,配成100 ng/mL的标准品工作液(或加入1mL标准品&样品稀释液后,静置1-2分钟,用低速涡旋仪充分混匀。可通过低速离心去除涡旋过程中产生的气泡)。然后根据需要进行倍比稀释。建议配制 成以下浓度:100、50、25、12.5、6.25、3.13、1.56、0 ng/mL。倍比稀释方法:取7支EP管,每管中加入500 μL标准品&样品稀释液,从100 ng/mL的标准品工作液中吸取500 μL到第一支EP管中混匀配成50 ng/mL的标准品工作液,按此步骤往后依次吸取混匀。如下图。提示:最后一管直接作为空白孔,不需要再从倒数第二管中吸取液体。倍比稀释的标准品工作液需要现配现用。

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4. 生物素化抗体工作液:实验前计算当次实验所需用量(以50 μL/孔计算),实 际配制时应多配制100-200 μL。使用前15分钟,将浓缩生物素化抗体于 800×g离心1分钟,以生物素化抗体稀释液将100×浓缩生物素化抗体稀释成 1×工作浓度(例如:10 μL浓缩液+990 μL稀释液)。现配现用。

5. HRP酶结合物工作液:HRP酶结合物为HRP酶结合亲和素。实验前计算当次实验所需用量(以100 μL/孔计算),实际配制时应多配制100-200 μL。使用前15分钟,将浓缩HRP酶结合物于800×g离1分钟,以酶结合物稀释液将100×浓缩HRP酶结合物稀释成1×工作浓度(例如:10 μL浓缩液+990 μL稀释液)。现配现用。

二、操作步骤:

1. 分别设定标准孔、空白孔和样本孔。标准孔加入50 μL 倍比稀释的标准品,空白孔加入50μL标准品&样本稀释液,其余孔加入50 μL 待测样本(建议所有的待检样本和标准品在检测中设立复孔;建议通过预实验或咨询技术 支持确定待检样本的稀释倍数)。立即每孔加入配好的生物素化抗体工作液50 μL。给酶标板覆膜,37℃孵育45分钟。提示:加样时将样品加于酶 标板底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,避免产生气泡。加样时间宜控制在10分钟内。

2. 甩尽孔内液体,在洁净的吸水纸上拍干。每孔加洗涤液350 μL,浸泡1分钟,吸去或甩掉酶标板内的液体,拍干。重复此洗板步骤3次。提示:此处与其他洗板步骤都可使用洗板机。洗板完成后请立即进行下步操作,不要让微孔板干燥。

3. 每孔加 HRP 酶结合物工作液100 μL,酶标板加上覆膜,37℃温育30分钟。 4. 甩尽孔内液体,洗板5次,方法同步骤 2。

5. 每孔加底物溶液(TMB) 90 μL,酶标板加上覆膜,37℃避光孵育 15 分钟左右。提示:根据实际显色情况酌情缩短或延长,但不可超过30分钟。当标准孔出现明显梯度时(前4个显色孔出现明显蓝色梯度),即可终止。提前15分钟打开酶标仪预热。

6. 每孔加终止液50 μL,终止反应。提示:终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。

7. 立即用酶标仪在450 nm波长测量各孔的光密度(OD 值)。

更多有关Elabscience叶酸/维生素B9(FA/VB9)ELISA试剂盒的使用方法,请联系Elabscience试剂盒代理——北京百奥创新科技有限公司。