免费咨询热线:
15522676233
技术文章
首页 > 技术中心 > WB实验中出现不同情况的条带问题怎么解决呢?

WB实验中出现不同情况的条带问题怎么解决呢?

 更新时间:2024-02-19 点击量:737

Western blot是一个非常基础的实验,但是着实让我们头疼,即使是老手也挡不住WB实验的千锤百炼,懂得都懂,当WB实验中出现不同情况的条带问题怎么解决呢?,我们一起来探讨一下,希望对正在做WB实验的小伙伴提供一个避雷参考!

情况一:条带呈笑脸状

1.迁移过快或电泳温度过高:降低电压或低温电泳。

2.配胶问题,凝胶不均匀冷却,中间冷却不好迁移过快:重新配胶,电泳槽老化换新。

情况二条带呈皱眉状 

配胶问题,可能是装置不合适特别可能是凝胶和玻璃挡板底部有气泡或者凝胶两边聚合不wan全。

况三条带弥散或拖尾

1. 蛋白上样量过多:降低上样量。

2. 电泳结束后未立即转膜:电泳后尽快转膜。

3. 蛋白降解:加入蛋白酶抑制剂。

4.样品核酸污染:可进行超声及核酸酶处理或样品有不溶物,可稀释,充分裂解或离心操作。

情况四:条带偏斜

电极不平衡或者加样位置偏斜。

情况五:条带向两边扩散,不完整

1.抗体孵育不均一,或未充分结合:增加抗体孵育时间,建议4℃过夜孵育。

2.抗体浓度偏低:使用高浓度抗体。

3.化学发光液未加均一:适当增加化学发光液的量。

4.反应时间不够:增加化学发光显色反应的时间。

情况六:条带空心

可能由于蛋白浓度过高导致的底物消耗完毕,建议稀释样本浓度。

情况七:条带有不均匀的污点

1.膜上有气泡:转膜时将PVDF膜慢慢贴胶上后,可以用玻璃棒轻轻滚动,以驱赶膜与浇之间的气泡。

2.设备污染:确保设备清洗干净。

3.孵育或洗涤溶液不足,确保孵育洗涤充分。

4.封闭液未混匀,确保混匀,使用新鲜的封闭液,避免颗粒不溶物。

5.膜被污染实验操作人员戴手套和口罩,穿实验服,保持膜的干净。禁止用手直接触摸膜。

情况八:深背景出现白色反光条带

中心部位高浓度 HRP 将底物消耗过快,中间部位底物消耗完后无法发光。

1.蛋白上样量过多:降低蛋白上样量。

2.一抗二抗浓度过高:适当加大抗体稀释。

况九:哑铃型条带

1. 配胶问题,可能拔胶时用力过猛,导致胶变形突起:重新配胶。

2. 蛋白质有杂质。

情况十:出现非均一性背景,脏乱

膜可能曾经干过:可在实验过程中要保证膜一直处于湿润状态

以上就是有关于WB实验中出现不同情况的条带问题怎么解决的问题解答,如果您有更多关于WB实验条带问题想咨询请给百奥创新留言,我们会第一时间给您回复!