免费咨询热线:
15522676233
技术文章
首页 > 技术中心 > 流式细胞术的样品制备方法

流式细胞术的样品制备方法

 更新时间:2024-03-05 点击量:263
  流式细胞术的测定对象是单细胞或单个微粒,在FCM技术中能够制备出合格的单细胞悬液是非常重要的环节,单细胞悬液来自于动植物的不同组织器官,也可来自于非生物样品,FCM中大多数为生物样品,生物样品主要来源于培养细胞、血液、新鲜实体组织以及石蜡包埋组织等,不同的组织有不同的单细胞分散方法,因此建立切实可行的FCM单细胞悬液的具体制备方法,在流式细胞分析中至关重要。那么你知道流式细胞术的样品制备方法都有什么吗?让我们一起来看看吧!
 
  酶消化法
 
  酶的作用原理主要有三方面:一是破坏组织间的胶原纤维、弹性纤维等,二是水解组织细胞的紧密连接结构的蛋白质,三是水解组织间的粘多糖物质。酶消化法是实体组织分散为单细胞的主要方法之一。
 
  机械法
 
  机械法分散实体组织包括:用剪刀剪碎组织或用锋利的解剖刀剁碎组织,用匀浆器匀浆,用细注射针头反复抽吸细胞等,最后用300目尼龙网过滤细胞得到单细胞悬液。
 
  化学处理法
 
  化学处理法的主要原理是:将组织细胞间起粘连作用的钙、镁离子置换出来,从而使细胞分散下来。
 
  四、注意事项:
 
  1. 需要注意的是酶学方法的使用条件和影响因素(如酶浓度、酶效价、作用时间、pH值)等,例如胃蛋白酶在碱性环境下失去活性、胰酶在中性溶液中活性欠佳。
 
  2. 采用网搓法同样也可获得大量细胞,但机械法容易造成细胞碎片和细胞团快,因此常与其他方法配合使用。
 
  3. 新鲜组织标本应及时处理保存,避免细胞自溶导致DNA降解。
 
  4. 根据实验目的选择最佳固定方式;如采用酶学法需注意酶的溶剂、消化时间、pH值、浓度等,同时根据组织成分合理选用酶类,例如含大量结缔组织肿瘤,如食管癌、乳腺癌、皮肤癌等应选择胶原酶。
 
  更多有关流式细胞术的样品制备方法,请联系北京百奥创新科技有限公司。