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Elabscience荧光双染细胞凋亡检测试剂盒(E-CK-A211)产品介绍

 更新时间:2024-03-15 点击量:305

Elabscience®自主研发的 Annexin V-FITC/PI Apoptosis Kit,可用于检测悬浮细胞和贴壁细胞的凋亡。Annexin V是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸 (PS) 有高度亲和力。当细胞发生凋亡时,膜内侧的磷脂酰丝氨酸 (PS) 外翻到膜表面,而被荧光染料 FITC 标记的Annexin V结合,可通过流式细胞仪或荧光显微镜进行检测。由于凋亡晚期或坏死细胞膜丧失完整性,而碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)可与双链 DNA 特异性结合并产生强烈的荧光,与 Annexin V搭配使用,可区分处于不同凋亡时期的细胞。本试剂盒检测喜树碱诱导的Jurkat细胞凋亡效果如下图所示:

image.png

实验操作:

一步法

1.细胞按照实验方案进行凋亡诱导,300 ×g 离心 5 min,弃上清,收集细胞,PBS 洗涤一次,轻轻重 悬细胞并计数。

2.取 1~5 × 105 重悬的细胞,300 ×g 离心5 min,弃上清。用 PBS 洗涤细胞一次,离心后弃上清,加入500 μL稀释的1 × Annexin V Binding Buffer 重悬细胞。

3.细胞悬液中加入5μLAnnexin V-FITC Reagent5μLPI Reagent (50μg/mL)

4 轻柔涡旋混匀后,室温避光孵育 15~20 min

5 立即上机检测。如不能及时检测,请于冰上避光静置并于1小时内完成检测。

注:流式细胞仪检测时Annexin V-FITC可用FITC通道,PI优先选择 PerCP/Cy5.5 通道,其次是ECD通道。

两步法

1.细胞按照实验方案进行凋亡诱导,300×g离心5 min,弃上清,收集细胞,PBS 洗涤一次,轻轻重悬细胞并计数。

2.取1~5 × 105重悬的细胞,300 ×g离心5 min,弃上清。用PBS洗涤细胞一次,离心后弃上清,加入100 μL稀释的1 × Annexin V Binding Buffer重悬细胞。

3.细胞悬液中加入2.5 μLAnnexin V-FITC Reagent2.5μLPI Reagent (50μg/mL)。(由于两步法 分辨率更高,染色液用量减半依然可得到媲美一步法的效果;用户亦可根据自己的模型进行滴定后加入适量的染色液,用更少的量获得高质量的结果。)

4.轻柔涡旋混匀后,室温避光孵育15~20 min

5.加入400 μL稀释的1 × Annexin V Binding Buffer,混匀样本。

6.立即上机检测。如不能及时检测,请于冰上避光静置并于 1 小时内完成检测。

注:流式细胞仪检测时Annexin V-FITC可用FITC通道,PI 优先选择 PerCP/Cy5.5 通道,其次是ECD通道。

产品选购:

货号

产品名称

规格

E-CK-A211

Annexin V-FITC/PI荧光双染细胞凋亡检测试剂盒

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