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碧云天BL21 Star(DE3)超级感受态细胞(D1019S)现货供应

 更新时间:2024-04-17 点击量:233

产品名称:碧云天BL21 Star(DE3)超级感受态细胞(D1019S)现货供应

产品货号:D1019S

产品品牌:碧云天

产品简介:

碧云天BL21 Star(DE3)超级感受态细胞是一种可以用于将异源蛋白以超高水平表达的E. coli BL21 Star(DE3)即用型化学感受态细胞。使用pUC19质粒进行热激活转化,转化效率可以高达1×108cfu/μg DNA以上。

E. coli细胞具有内源性的mRNA降解小体,其中包含由rne131基因编码的RNase E。BL21 Star(DE3)中rne131的基因突变,导致RNase E功能缺陷,增加了目的基因的mRNA稳定性,表现为重组蛋白的超高得率。

使用说明:

1.解冻感受态细胞。取感受态细胞放置冰浴或冰水浴中融化,通常需要5分钟以上的时间。解冻后须尽量在10分钟内使用,放置时间过长会影响转化效率。

2.DNA样品的转化。取一管感受态细胞,加入DNA样品,例如质粒、连接产物或重组产物等,轻轻弹击管底约2-3次或轻轻晃动约2-3次以混匀,立即冰浴静置30分钟。

注:所用DNA体积通常不宜超过感受态细胞体积的10%,混合时不得使用移液器进行吹打。如果用于质粒的转化扩增,冰浴静置约10分钟,后续可以直接涂板并培养过夜;如果用于连接产物或重组产物的转化,建议冰浴静置30分钟并严格执行后续的热激处理和复苏培养等步骤,以提高转化效率。

3.热激处理。将冰浴放置的离心管快速置于42℃水浴中,静置热激45秒。随后立即转移至冰水浴中静置2分钟以快速冷却至接近零度。热激及转移至冰浴过程中切勿晃动离心管。

4.复苏培养。加入900μl不含抗生素的LB培养基,颠倒数次混匀,37℃摇床约150rpm复苏培养1小时。如果用于质粒的转化扩增,复苏培养10-20分钟也wan全足够了;如果用于连接产物或重组产物的转化,建议严格进行复苏培养操作。

5.收菌涂板。约5000×g室温离心1分钟,沉淀细菌,吸除约900-950μl上清,余下约50-100μl上清。用移液器轻轻吹打并重悬菌体,随后涂布到含相应抗生素的LB平板上。

注:如果用于质粒的转化扩增,可以仅取少量进行涂板;如果用于连接产物或重组产物的转化,建议取所有重悬的菌液涂板。

6.将平板倒置放于37℃培养箱培养过夜。

产品选购:

货号

产品名称

规格

 D1019S

 BL21 Star(DE3)超级感受态细胞

10×100μl

50×100μl

北京百奥创新科技有限公司现货供应碧云天BL21 Star(DE3)超级感受态细胞(D1019S),欢迎选购!

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