Western blot的内参该如何选择

　　内参即是内部参照（Internal Control），对于哺乳动物细胞来说一般是指由管家基因编码表达的蛋白（Housekeeping Proteins），它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测蛋白的表达水平变化时常用它来做参照物。那么你知道Western blot的内参该如何选择吗？让我们一起来看看吧！

　　为什么要使用内参

　　Western blot除了能证明某样品含有某种蛋白之外，其最为重要的作用是比较不同条件下或者不同组织中，目的蛋白表达量的相对多少。即为蛋白表达水平最直接的证据。要衡量蛋白的表达水平，前提条件就是等量的上样量。然而如果仅将蛋白浓度测定作为规范需相互比较的各种样品间上样量等同的唯1方法，显然是不可取的。

　　在Western Blot中使用内参其实就是在WB过程中另外用内参对应的抗体检测内参，这样在检测目的产物的同时可以检测内参的表达，由于内参在各组织和细胞中的表达相对恒定，借助检测每个样品内参的量就可以用于校正上样误差，这样半定量的结果才更为可信。此外使用内参可以作为空白对照，检测蛋白转膜情况是否完q、整个Western Blot显色或者发光体系是否正常。

　　如何选择内参

　　一般来说，我们再选择内参时需要考虑以下几个因素：

　　1、蛋白表达丰度：内参应该在样本中稳定表达，且表达量相对较高，这样才能有效地检测到内参信号。

　　2、分子量：内参的分子量应该与目标蛋白的分子量有明显差异，以便在电泳分离时能够分开。

　　3、细胞类型和组织特异性：根据你的实验样本类型，选择适合的内参。例如，β-actin常用于哺乳动物细胞，而Tubulin则更适合检测细胞骨架蛋白。

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