原代细胞分离的原理

　　原代细胞分离培养是一项实验技术，它涉及从生物体中提取组织或细胞，并将它们转移到体外环境中进行培养。这些来源包括各种组织器官、外周血和胚胎等。在培养过程中，原代细胞的生长速度相对较慢，通常在培养的10代内停止生长。因此，通常将培养的细胞归类为原代细胞培养，这些细胞包括第1到第10代的细胞。下面让我们一起来看看原代细胞分离的原理吧！

　　实验原理：

　　原代细胞保持了体内原始细胞的生物学特性，接近于体内的生长特性。因此，它们为研究生物体细胞的生长、代谢和繁殖提供了有力的工具。此外，原代细胞培养还为精准医疗的肿瘤诊治模式和个体化精准用药提供了支持。

　　常见的原代细胞类型包括上皮细胞、内皮细胞、成纤维细胞、角质形成细胞、黑色素细胞、神经元、星形胶质细胞、肝细胞、骨骼肌细胞、平滑肌细胞、成骨细胞、肌细胞、软骨细胞、脂肪细胞、滑膜细胞、毛细胞、血细胞和干细胞。

　　在原代细胞分离培养中，首先从动物体内取出各种组织，然后采用不同的方法，如酶消化（通常使用胰蛋白酶/胶原酶）、螯合剂（通常是EDTA）或机械分散，将组织分散成单个细胞。这些单细胞被放置在适当的培养基中进行培养，以在离体环境中存活、生长和繁殖。这个过程称为原代培养，主要包括取材、分离和培养三个步骤。

　　以小鼠结肠细胞为例，为了提高目标细胞的纯度，原代提取的细胞通常与其他细胞混合。通过采用生物酶梯度消化和差速贴壁等方法，可以获得纤维组织和上皮组织的高纯度目标细胞。具体地，使用胶原酶I和分散酶II消化结肠组织可分散细胞间质，而差异消化和差速贴壁方法则能有效去除成纤维细胞，最终获得高度纯净的结肠上皮细胞。

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