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你知道细胞转染实验中转染效率低的原因吗?

 更新时间:2024-05-22 点击量:173

转染细胞效率低下的原因在生物医学研究中,将外源基因导入细胞以研究其功能或使细胞展现出新的特性是非常常见的实验手段。然而,转染细胞的效率低下一直是科研人员面临的一大难题。今天小编将探讨转染细胞效率低下的原因,以期为提高转染效率提供有益的思路。

1.细胞类型和状态  

不同的细胞类型具有不同的转染效率。一些难转染的细胞,如神经元和肝细胞,通常需要更复杂的转染技术。此外,细胞的生长状态也会影响转染效率,处于对数生长期的细胞更容易接受外源基因。如果是贴壁细胞的话,贴壁率应该在70-80%;如果是悬浮细胞的话,应该是6X105/孔(24孔板),一般是转染前一天换液,转染前用无血清培养基或PBS洗细胞一次。转染的整个过程都不应该有抗生素。

2.转染方法

选择合适的转染方法对提高转染效率至关重要。常用的转染方法包括化学法、物理法和生物法。每种方法都有其优缺点,适用于不同的细胞类型和实验需求。科研人员应根据自己的实验条件和要求选择适合的转染方法。

3.转染试剂

转染试剂的质量和浓度直接影响转染效率。一些劣质的转染试剂可能导致细胞毒性过大,从而降低转染效率。因此,选择高质量的转染试剂是提高转染效率的重要因素。

4.基因载体

基因载体的种类和结构对转染效率具有重要影响。不同的基因载体适用于不同的细胞类型和实验需求。此外,基因载体的包装和滴度也会影响转染效率。

5.培养条件

细胞培养条件,如培养基、血清和添加剂的质量以及培养温度和湿度等,都会影响细胞的生长状态和活力,从而影响转染效率。一般要在转染后的4-6小时换液且换为有血清的培养基。也可以在原来的无血清培养基里面滴加血清

6.转染用的质粒也要保证数量和质量,一般要高于2 μg以上。如果质粒纯度不够或含有对细胞有毒害的物质,会影响转染效率。

7.操作手法

脂质体和DNA/RNA混合物应当一滴一滴地滴下来,从培养皿一边滴到另一边,边滴边轻摇培养皿,以确保均匀分布和避免局部高浓度。这些都是一些细枝末节,但是,如果不注意的话,影响转染效率。

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