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如何选择荧光蛋白

 更新时间:2024-08-22 点击量:102
  如何选择荧光蛋白
  荧光标记在生物学的各个研究领域拥有广泛的应用,已成为探索体内或细胞结构与功能的重要工具。通常存在两种荧光标记方式,一是利用细胞表达的荧光蛋白,另一是采用化学合成的荧光分子。下面让我们一起来看看该如何选择荧光蛋白吧!
  1.激发波长/发射波长:每一种荧光蛋白都具备d特的激发波长和发射波长,因此,所选荧光蛋白必须与实验系统的激发和检测能力相匹配。
  2.寡聚反应:首代荧光蛋白易于形成寡聚体,当其与目标基因融合表达时,可能会对目标基因蛋白的生物学功能产生影响。因此,在融合表达时,建议使用单体荧光蛋白,如mCherry或EGFP。
  3.氧气:许多荧光蛋白的成熟过程需要氧气参与,尤其是源自GFP的荧光蛋白,如EGFP、ECFP和EYFP。若这些荧光蛋白处于缺氧环境中,可能无法观察到荧光信号。
  4.成熟时间:荧光蛋白的成熟时间指的是其正确折叠和发色团形成所需的时间,此过程可能持续几分钟至数小时。因此,在选择合适的荧光蛋白时,考虑其成熟时间非常必要。
  5.温度:温度对荧光蛋白的成熟时间和荧光强度有影响。
  6.亮度:荧光蛋白的亮度由消光系数和量子产率的乘积计算得出。在许多情况下,与EGFP相比较荧光蛋白的亮度,发现某些荧光蛋白十分暗淡,因此,亮度也是需要考虑的因素之一。
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