生物发光实验

1.确定萤光素酶

常见的荧光素酶包括萤火虫荧光素酶（Firefly luciferase，Fluc）、海洋蛋白质荧光素酶（Renilla luciferase，Rluc）和高司氏荧光素酶。它们在特定条件下都能催化各自的底物产生相应的光，而无需外部激发器。其中，Fluc是应用最为广泛的荧光素酶。

推荐使用Goldbio的D-Luciferin做为萤火虫荧光素酶的底物

2.构建稳转萤光素酶细胞株

稳转株即稳定表达细胞株，指的是基于某一细胞系构建的持续过表达或干扰某特定基因的细胞系。慢病毒感染-药物筛选法是目前广泛应用的稳转株构建方法，具有高效整合、目标细胞广泛等特点。

3.验证稳转株

构建得到稳转株后，可以进行体外实验以验证Fluc稳转株效果。可以将生长良好的Fluc细胞消化，随后用培养基稀释成系列梯度浓度并分别接种于96孔板中，每孔100 μL，每个浓度设置三平行孔。

4.稳转株注射动物

成功构建稳转株后，即可进行动物移植模型构建。

5. 注射底物

注射的细胞一般会在2-3周成瘤（具体时间根据细胞种类，接种数量，细胞活力会有所不同），可以根据实验设计进行一定处理。

6.活体成像

活体成像建议直接使用带有麻醉装置的小动物活体成像仪，这样操作更方便，而且可以更准确的控制小鼠麻醉的情况。如仪器不带麻醉装置，也可自行麻醉小鼠后置于小动物活体成像仪中进行成像。检测途中要注意防止小鼠中途苏醒而离开成像台。

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