Toxin肠毒素的用途——作为超抗原
原理:葡萄球菌肠毒素属于超抗原,能够非特异性激活T细胞增殖并释放过量细胞因子,可用于抗肿瘤治疗。T细胞活化通过暴露于特定抗原(例如Toxin葡萄球菌肠毒素B(SEB))来测定。SEB是一种细菌毒素,能够与抗原呈递细胞(APC)和TCR上的MHCII类分子结合,诱导促炎细胞因子的释放,例如IL-2、IL-6、TNF-α和IFN-γ。
应用举例:诱导活化T细胞
一、将PBMCs(120 K/孔)与Nuclight绿色试剂标记的Ramos细胞(40/孔)进行共培养。使用CD3/CD28 Dynabead、CD3×CD19 BiTE抗体或Toxin葡萄球菌肠毒素B(SEB)诱导活化。在60 h时,使用T细胞活化分析试剂盒、T细胞介导的细胞杀伤分析试剂盒和T细胞耗竭分析试剂盒联合iQue®3系统分析10µL样本。
每种活化因子会导致不同的CD3+T细胞蛋白表达和杀伤特征:
1.CD3/CD28 Dynabead诱导的T细胞活化呈现浓度依赖的特性。最高的微球数量对应于最大的活化标志物表达百分比。该结果与高水平的细胞耗竭标志物呈现相关性。
2.与Dynabead和SEB相比,CD3×CD19 BiTE抗体介导的靶细胞死亡增量最多,活化和耗竭水平显著降低。这说明BiTE介导的免疫细胞杀伤时间可能持续的较长。
3.SEB刺激,即使在低浓度下,也可使T细胞活化并产生最大杀伤率,导致高水平的T细胞耗竭。

二、使用来自T细胞活化分析试剂盒、T细胞介导的细胞杀伤分析试剂盒和T细胞耗竭分析试剂盒的Qbeads测定Nuclight绿色标记的Ramos和PBMC(3:1比例)共培养时细胞因子的释放数据。在多个试剂盒中均检测了IFNɣ和TNFa的浓度,以便将所有试剂盒的测定结果取平均值。
各个活化因子对细胞因子分泌和对表面蛋白表达的影响相当:
1.在使用的微球数量范围内,CD3/CD28 Dynabead诱导的细胞因子释放呈浓度依赖性增加。
2.与微球或SEB相比,CD3×CD19 BiTE刺激后的细胞因子释放始终较低(最高刺激浓度下的颗粒酶B浓度除外)。该结果表明,在降低毒性风险的情况下(例如细胞因子释放综合征),可以实现高水平的细胞杀伤。
3.SEB可诱导高水平的细胞因子释放(即使在低浓度下)。

三、将PBMCs(25 K/孔)与贴壁AU565细胞(5 K/孔)进行共培养。使用SEB诱导T细胞活化。在60 h时,使用T细胞活化分析试剂盒、T细胞介导的细胞杀伤和T细胞耗竭分析试剂盒联合iQue®3系统提取靶细胞和效应细胞,进行终点分析。
SEB活化诱导靶细胞杀伤呈浓度依赖性增加,伴随CD3+T细胞上活化(CD69、CD25和HLA-DR)和耗竭(PD-1、LAG-3和TIM-3)标志物的高表达(在所有使用的SEB浓度中均是如此)。

其他应用:抗体制备、毒素检验、多种免疫和偶联试验、药物研发等。