英诺思EasyIso™小鼠CD3 T细胞分离试剂盒（SN4101）实验操作全解析

　　英诺思EasyIso™小鼠CD3 T细胞分离试剂盒（SN4101）实验操作全解析

　　作为免疫学研究的重要工具，英诺思EasyIso™小鼠CD3 T细胞分离试剂盒（货号SN4101）凭借其18分钟快速分离和高达99%的纯度表现，已成为实验室高效获取高质量T细胞的s选方案。本文将详解其无柱磁极分离技术的操作流程，助您快速掌握实验要点。

　　一、实验准备

　　核心试剂：含生物素偶联抗体的分离鸡尾酒（EasyIso™Mouse CD3 T cell Isolation Cocktail）、链霉亲和素纳米磁珠（Streptavidin Nanobeads）

　　专用缓冲液：FACS Buffer（含0.02%EDTA+2%FBS，比常规PBS提高20%细胞得率）

　　仪器配置：磁力架（单孔/联排）、70μm无菌尼龙滤网、离心机

　　二、六步标准化流程

　　1.单细胞悬液制备

　　取小鼠脾脏研磨后经70μm滤网过滤，调整浓度至1×10⁸cells/mL，全程保持无菌操作。

　　2.抗体标记

　　按100μL/mL比例加入分离鸡尾酒，常温孵育10分钟。该步骤通过生物素抗体特异性标记非CD3细胞。

　　3.磁珠偶联

　　震荡混匀纳米磁珠30秒后，以100μL/mL比例加入样本，轻柔混匀后静置5分钟，形成磁珠-非靶细胞复合物。

　　4.体积调整

　　根据容器规格加入FACS Buffer：

　　o流式管：补至2.5 mL

　　o离心管：补至7.5 mL

　　5.磁极分离

　　样本垂直置于磁力架：

　　o单孔磁架：吸附3分钟

　　o联排磁架：吸附5分钟

　　通过无柱磁极技术直接倾倒上清，即可在2分钟内完成目标细胞收集。

　　6.即时应用

　　分离后的CD3 T细胞无需额外处理，可直接用于：

　　✔流式细胞术

　　✔体外培养扩增

　　✔细胞因子分泌检测

　　三、关键质控要点

　　1.样本预处理：脾脏无需裂红处理，避免细胞活性损失

　　2.无菌保障：全程在生物安全柜中操作，耗材预先灭菌

　　3.磁珠活化：使用前充分震荡磁珠30秒，确保分散均匀

　　4.渗透压稳定：严格使用专用FACS Buffer，维持细胞膜完整性

　　四、性能验证数据

　　C57BL/6小鼠脾脏样本测试显示：

　　初始CD3+比例：33%（未分选）

　　分选后纯度：98.7%（流式验证）

　　细胞活性：>95%（台盼蓝检测）

　　六、选择英诺思SN4101的三大优势：

　　1.时间效率：20分钟内完成全流程，比传统分选快3倍

　　2.成本节约：无需购置分选柱，单次实验耗材成本降低40%

　　3.下游兼容：分离细胞可直接用于转录组测序等高敏实验

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