免费咨询热线:
15522676233
技术文章
首页 > 技术中心 > 抗体制备方法

抗体制备方法

 更新时间:2019-05-29 点击量:1216
   抗体制备方法
 
  制备出效价高,特异性强,稳定性好的抗体是免疫学实验取得成功的基础,抗体质量的好坏直接影响着研究者研究的成败,不同的免疫学实验方法(如ELISA,IHC,IP,ICC,SDS-PAGE,WB等)对抗体的效价,浓度和纯度有不同的要求。我们知道,一般免疫血清中含有特异性抗体和非特异性抗体,血清蛋白以及其他各种杂蛋白等,在制备特异性抗体过程中当抗体的效价达到实验预期之后,我们所制备的抗体的纯度关键取决于所选择的纯化方法。下面就一一介绍常用抗体纯化方法及其相关原理。
 
  沉淀法
 
  硫酸铵/辛酸沉淀法是纯化抗体传统的方法之一,被广泛用于血清和腹水抗体的浓缩和粗纯,此方法可大规模粗纯抗体,但纯化后纯度不高,还需配合其它方法继续纯化。通常是将饱和硫酸加入血清或腹水中,将抗体沉淀下来,然后在溶解沉淀继续下一步的纯化。辛酸沉淀抗体通常要先将腹水或血清的pH调4.8,然后缓慢的滴加辛酸,是蛋白沉淀,抗体在上清中,上清继续下一步的纯化。
 
  离子交换层析
 
  离子交换层析也常用于抗体的纯化,通量大,工业上用离子交换层析成本低,主要用于除去非抗体蛋白,及用亲和层析纯化时混入的Protein A/G等亲和填料脱离的配基,内毒素的去除等。离子交换纯化时,根据抗体的pI选择合适的离子交换类型,在pI未知时可以分别用阴阳离子交换填料去试验。