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胎牛血清如何解冻

 更新时间:2024-01-19 点击量:440

胎牛血清如何解冻

胎牛血清在生物医学研究,以及细胞培养领域中,应用广泛。胎牛血清含有丰富的生长因子、蛋白质和其他生物分子,对细胞生长和增殖具有重要作用。使用胎牛血清,先要将其解冻融化。融化胎牛血清时采取正确的方法非常重要,不正确的解冻过程可能会导致损坏或降低血清的有效性,影响到实验的可重复性和准确性。那么你知道胎牛血清该如何解冻吗?让我们一起来看看吧!

一、解冻方法

胎牛血清中珍贵的生长因子等活性物质,它们在解冻过程中,有着与细胞复苏类似的经历,都需要快速解冻才能最da程度地保留生物活性。

4℃过夜这样的长时间处理,很有可能会导致一部分的损失,影响细胞生长,为了更好地保留胎牛血清中的活性成分,使细胞培养更稳定,我们推荐使用三步法解冻胎牛血清。

 如果是储存在-80℃的胎牛血清,则需提前几天先转移至-20℃冰箱中(至少24小时),再使用三步法溶解,避免温差过大使血清失活。

阶梯解冻

温度

100ml

500ml

1

温度15-20°C水浴

5分钟

20分钟

室温

35分钟

90分钟

2

20°C水浴

15分钟

25分钟

3

37°C水浴

20分钟

35分钟

彻di解冻胎牛血清后,可以根据实验需求,将其分装,保证每一份够一次使用量即可,比如:25ml/管、50ml/管等。密封好后赶紧放回-20℃冰箱继续储存。需要配制培养基的时候,再从-20℃冰箱中取出一管来解冻使用,可以有效避免反复冻融的问题(遵循现用现配、现配现解冻的原则)。配好的培养基可以放到4℃冰箱进行储存。

二、常见问题

1. 胎牛血清有絮状沉淀

把血清置于37℃中过久,或者没有阶梯解冻,还有解冻水浴时振荡不足导致局部温差过大等原因,都会使血清产生一些沉淀。

正确的处理方法:可以等待其自然沉降,然后取上清液使用。若比较急用、或者絮状沉淀过于分散以至于无法取上清,可以20003000rpm离心5min。不推荐使用过滤法,血清的蛋白容易导致滤膜堵塞。热灭活之后的血清更容易产生沉淀。

2. 热灭活?血清热灭活是什么,有必要热灭活吗?

血清热灭活主要是为了除去对热敏感的补体。

补体是广泛存在于人和脊椎动物体血清及组织液中,不耐热,活化后具有酶活性、可介导免疫应答和炎症反应的一类蛋白质。补体的作用包括但不限于调理吞噬、裂解细胞、介导炎症、免疫调节和清除免疫复合物等。但由于胎牛胎龄8个月以下,尚未形成完善的补体系统,对免疫实验的影响较小,而热灭活血清反而会使血清中的很多重要微量生长因子分解流失,因此大部分实验不推荐热灭活血清。

更多有关胎牛血清如何解冻的问题,请联系北京百奥创新科技有限公司。