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如何区分各种PCR技术

 更新时间:2024-01-19 点击量:290
  如何区分各种PCR技术?
  PCR是聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)的简称,是一种体外扩增特定DNA片段的分子生物学技术,PCR技术有很多,那么我们该如何区分各种PCR技术呢?让我们一起来看看吧!
  一、普通PCR
  普通PCR即一代PCR,使用普通PCR扩增仪扩增靶基因,并通过琼脂糖凝胶电泳对产物进行定性分析。
  二、实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qPCR)
  实时荧光定量PCR,也叫Real-Time PCR,即二代PCR,是指在PCR扩增反应体系中加入荧光染料或者荧光基团,在整个PCR过程中通过收集荧光信号实时监测每一个循环中扩增产物量的变化,最后通过标准曲线和CT值对待测样品进行定量分析。qPCR常用的有两种方法:SYBR Green法和TaqMan探针法。
  三、数字PCR
  数字PCR即三代PCR,是对原始PCR的另一种改进,是一种能够实现核酸绝对定量的精准检测技术,基于泊松分布原理将核酸样品分配到大量独立、平行的微反应单元(纳升级)中,使每个反应室中平均只有一个拷贝或者没有目标DNA分子,然后加入荧光信号进行扩增,从而实现靶标核酸分子的绝对计数,提高检测灵敏度和准确度。
  四、逆转录PCR(Reverse T ranscription-PCR,RT-PCR)
  逆转录PCR也叫反转录PCR,将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增相结合,是PCR的一种广泛应用的变形。在RT-PCR中首先经反转录酶将一条单链RNA逆转录成cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段。作为模板的RNA可以是总RNA、mRNA或体外转录的RNA产物。无论使用何种RNA,关键是确保RNA中无RNA酶和基因组DNA的污染。RT-PCR技术灵敏且应用广泛,可用于检测细胞中基因表达水平,细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。一般通过一步法或两步法进行,一步法是RT反应和PCR反应在同一试管中进行;而在两步法中两个反应是分开依次进行的。
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