ELISA检测方法
一、elisa直接法
直接ELISA法是将抗原固定在96孔板上，然后用酶标抗体直检测抗原。直接ELISA实验步骤少，检测速度快，不需要用到二抗，避免了交叉反应，测定结果不容易出错。但是由于直接ELISA的抗原通过吸附而不是特异性固定的，样本中的所有蛋白质(靶蛋白及其他杂质蛋白)都会固定在96孔板上，导致背景比较高。而且直接ELISA每种靶蛋白都需要标记与其特异性结合的一抗，实验显得不太灵活。另外由于没有使用二抗，没有放大作用，降低了测定的灵敏度。
优点：实验步骤少，检测速度快，因无须使用二抗可避免交互反应。
缺点：试验中的一抗都得用酶标记，但不是每种抗体都适合做标记，费用相对提高。
二、Elisa间接法
在直接法的基础上，Lindström 和Wager 引入二抗建立了间接 ELISA 方法，通过使用一抗能结合多个二抗，从而放大了检测灵敏度，同时，不需要标记一抗，只需要加入抗一抗种属的标记二抗就可以进行检测，克服了直接法的局限性。
优点：只要更换不同的固相抗原，就可以用标记二抗检测各种与抗原相结合的抗体，二抗可以加强信号，不加标记一抗体则能保留一抗最多的免疫反应性。
缺点：存在交叉反应的可能性，抗原纯度不够会导致非特异结合，产生假阳性。
三、Elisa夹心法
双抗体夹心法将捕获抗体固定在96孔板上，加入样品，通过捕获抗体结合目标抗原，洗去未结合的杂质后，加入酶标检测抗结合目标抗原的另一表位(如果检测抗体不带有标记，则需使用酶标二抗与检测抗体结合，这种称为间接夹心ELISA)，形成“sandwich” 的结构，此时的抗原就像被两个面包片夹着的奶油，通过酶催化发生显色反应就可以测定抗原的含量。双抗体夹心法测抗原，对抗原分子上两个不同抗原决定簇的单克隆抗体分别作为捕获抗体和酶标检测抗体。适用于测定二价或二价以上的大分子抗原，不适用于测定半抗原及小分子单价抗原，因其不能形成两位点夹心。
优点：高灵敏、高专一性，抗原无须事先纯化，进行操作时不需稀释，夹心ELISA尤其适用于复杂样品的分析，因为抗原不经纯化仍具能有高灵敏度和特异性。
缺点：抗原分子上需拥有两个不同抗原决定簇，对配对抗体要求很高，如果没有标准化的试剂盒或者已经通过测试的配对抗体，则需要进行配对抗体定制并进行优化，因为降低捕获抗体与检测抗体之间的交叉反应是非常重要的。
四、Elisa竞争法
竞争法是所有ELISA 里最为复杂的测试方法，通过检测竞争信号的强度来反应样品中的抗原水平，通常以酶标抗原作为竞争抗原，与样品来源的抗原形成直接竞争，抢夺过量的固定化抗体上的结合位点，因此竞争信号越高，说明样品中的抗原越少。竞争法ELISA既可用于检测抗体，也可用于检测抗原。
优点：可用于检测不纯的样品，且数据再现性高，特异性好。
缺点：操作方法更复杂一些，产品性能取决于抗体的亲和力。整体的敏感性和专一性都较差。
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