PEI线性转染试剂的转染步骤及应用

　　PEI线性转染试剂是一种基于聚乙烯亚胺（Polyethylenimine,PEI）的高性能基因转染工具，通过阳离子聚合物与核酸的静电结合实现高效、低毒的细胞内基因递送。核心原理：PEI分子富含氨基，在生理pH下带正电荷，可与带负电的DNA/RNA紧密结合形成纳米复合物。该复合物通过细胞表面负电荷蛋白多糖吸附，经胞吞作用进入细胞后，PEI的“质子海绵效应”吸收溶酶体内H⁺，导致溶酶体膨胀破裂，释放核酸至细胞质，从而实现基因表达。

　　PEI线性转染试剂的转染步骤：

　　1、复合物制备：

　　稀释核酸：将DNA/RNA（0.5~5μg）加入50~100μL无血清培养基中，轻柔混匀。

　　稀释PEI：按优化后的N/P比取PEI，加入等体积无血清培养基，涡旋1~2秒。

　　混合：将PEI溶液逐滴加入核酸溶液中，边加边涡旋，室温静置5~15分钟（避免沉淀）。

　　2、转染细胞：

　　吸去细胞培养基，更换为含低血清的培养基（如DMEM+0.5%FBS）。

　　将PEI-核酸复合物逐滴加入细胞中，轻晃培养板混匀。

　　3、培养条件：

　　瞬时转染：4~6小时后更换为完q培养基（含10%~20%FBS），继续培养24~48小时检测表达。

　　稳定转染：48小时后添加选择性培养基（如抗生素筛选），持续培养1~2周。

　　PEI线性转染试剂的应用场景：

　　1、重组蛋白生产：在HEK293和CHO细胞中高效表达抗体、病毒载体（如AAV）。

　　2、基因功能研究：通过过表达或敲低特定基因，研究其在细胞信号、疾病模型中的作用。

　　3、细胞治疗开发：递送CRISPR/Cas9等基因编辑工具，或转染CAR基因制备CAR-T细胞。