培养基制备的注意事项

培养基的作用是为微生物提供生长和繁殖所需的营养物质和环境条件。培养基的质量直接关系到检验结果的准确性和可靠性，因此对于微生物检验而言，培养基的质量控制尤为重要。那么你知道培养基制备的注意事项有什么吗？让我们一起来看看吧！一、配置要求正确地制备培养基是进行微生物检验的基础。当实验人员使用商业化脱水合成培养基来配制培养基时，应严格按照产品说明进行配制，并做好配制记录。在配制过程中，实验人员需要遵守相关操作标准，戴上口罩以防吸入含有有毒物质的培养基粉末。在称量和溶解培养基时应使用专...

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蛋白表达的常见问题

蛋白表达实验的时，有时候实验会觉得参考实验方法和克隆的蛋白基因序列完q没有问题，但蛋白电泳就是没有结果。那么你知道蛋白表达的常见问题有哪些吗？让我们一起来看看吧！1、载体构建错误，很多克隆新人常常弄错读码框。比如Qiagen的pQE系列载体，其复制位点常有一两个碱基的差异；另外有些酶产生粘端有些酶产生平端，这些都容易导致读码框错误，从而无法表达出来。2、宿主菌选择不当。不同的宿主菌其基因型是不同的。有些经过特殊修饰的载体，或者特殊用途的载体，或者有特殊启动子的载体，必须选择适...

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PCR反应体系包括什么

PCR是一种选择性体外快速扩增DNA片段的方法。在体外以类似于细胞内DNA的半保留复制过程，以拟扩增的模板DNA分子，与模板DNA互补的寡核苷酸引物、DNA聚合酶、4种dNTP及适合的缓冲体系组成的反应体系，经过重复地变性一退火一延伸三步，扩增新的目的DNA链，这个过程通过控制反应体系的温度来实现。那么你知道PCR反应体系包括什么吗？让我们一起来看看吧！一、模板(template)模板即扩增用的DNA，可以是任何来源DNA(如基因组DNA、质粒DNA等)或RNA(如总RNA、...

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为什么qPCR提RNA不提DNA

定量PCR（qPCR）是一种在PCR反应中实时监测核酸扩增产物的方法。为什么qPCR提RNA不提DNA？RNA更能反映gene的表达水平依据中心法则，细胞内的DNA序列首先被转录成RNA分子，特别是信使RNA（mRNA），随后mRNA携带遗传信息，用于指导蛋白质的合成。mRNA的丰度和多样性是衡量基因表达水平的关键指标，它们直接关联到特定基因在特定时间和条件下的活性。与蛋白质相比，RNA的水平变化能够更快地反映基因表达的动态变化，因为RNA的稳定性相对较低，其水平变化可以迅速...

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RNA和WB蛋白的关系是怎样的？

qRT-PCR（定量逆转录聚合酶链反应）和Westernblot（蛋白质印迹法）是两种常用的生物分子检测技术，它们分别用于检测mRNA和蛋白质的表达水平。虽然蛋白质是由mRNA翻译而来，但mRNA的表达水平总是与蛋白质的表达水平一致吗？做实验任何一个结果如果你验证了几遍都是一样，那么请不要怀疑自己，也许不是你做错了，试图去解释这种现象!蛋白表达和RNA水平不一致的原因有：转录后调控：mRNA在转录后可以经历多种调控过程，如剪接、编辑、降解和稳定性调控。这些过程可以影响mRNA...

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