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RNA提取试剂盒具体该如何操作呢?

 更新时间:2022-05-26 点击量:626
 
  RNA提取试剂盒用于从细胞、组织、新鲜血液和病毒中提取200bp及以下的smallRNA,用LB10裂解样品后,加入氯仿,溶液分为无色水相和粉红色有机相,RNA在水相中;用RNA硅胶膜离心柱特异地吸附水相中的大分子量RNA(28SrRNA,18SrRNA,mRNA),流出液中的smallRNA用miRNA硅胶膜离心柱特异地吸附。与其它miRNA提取方法相比,该试剂盒裂解能力强、提取量高、专一性强,应用范围广。
  RNA提取试剂盒的操作步骤:
  1、样品处理:
  ①植物组织:取新鲜或-70℃冻存100mg组织在液氮中研磨,把粉末加入到1ml裂解液中混匀。
  ②动物组织:取新鲜或-70℃冻存100mg组织加1ml裂解液,用组织研磨杵或匀浆器匀浆处理。
  ③贴壁细胞:直接在培养板中加入裂解液裂解细胞,每106细胞加1ml裂解液。用取样器吹打混匀。
  ④细胞悬液:离心收集细胞。每106动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加1ml裂解液混匀。
  ⑤血液处理:取0.2-1ml新鲜血液加3倍体积红细胞裂解液,混匀后室温放置10分钟,10000rpm离心1分钟。弃上清,若沉淀含有红细胞,可加入2倍体积红细胞裂解液重复裂解步骤。离心后沉淀加入1ml裂解液混匀。
  2、将处理后的样品在室温放置5分钟,使得核酸蛋白复合物*分离。
  3、向匀浆样品中加0.2ml氯仿,盖好管盖,剧烈振荡15秒,室温放置3-5分钟。
  4、2-8℃12000rpm离心10分钟。RNA主要在上层无色的水相中,把水相转移到新管中,不要吸到沉淀。
  5、吸附柱前处理:在吸附柱中加入500ul洗柱液,室温放置2分钟,2-8℃12,000rpm离心2min,弃废液。
  6、第4步收集的上清中加入200ul无水乙醇混匀,加入吸附柱静置2分钟,2-8℃12000rpm离心2min,弃废液。
  7、向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),2-8℃12,000rpm离心2min,弃废液。
  8、向吸附柱中加入600ul漂洗液,2-8℃12,000rpm离心2min,弃废液。
  9、12000rpm离心2min,弃掉收集管,将吸附柱置于室温放置数分钟将吸附柱中残余的漂洗液去除。
  10、将吸附柱放入新管中,向膜中央滴加50-100ulRNasefreeddH2O,室温放置5min,12000rpm室温离心2min即得到RNA。