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RNA提取试剂盒在实验前也是有准备工作的

 更新时间:2022-05-28 点击量:490
 
  RNA提取试剂盒用于从细胞、组织、新鲜血液和病毒中提取200bp及以下的smallRNA,用LB10裂解样品后,加入氯仿,溶液分为无色水相和粉红色有机相,RNA在水相中;用RNA硅胶膜离心柱特异地吸附水相中的大分子量RNA(28SrRNA,18SrRNA,mRNA),流出液中的smallRNA用miRNA硅胶膜离心柱特异地吸附。与其它miRNA提取方法相比,该试剂盒裂解能力强、提取量高、专一性强,应用范围广。
  RNA提取试剂盒使用方法:将0.5mL结合液加入到一管装有1mgOligo(dT)纤维素的离心管中,放置5分钟后离心吸弃上清后待用。将制备的总RNA100μL加热到65℃5分钟后加入等体积的结合液,转移到装有Oligo(dT)纤维素的离心管中,颠倒混匀数次,离心后将上清转移到一个离心管中。用0.5mL结合液,混匀后4℃200g离心5分钟,小心弃上清。重复上步洗3-5次,用RNase-free水洗脱mRNA,用微量核酸沉淀剂沉淀回收mRNA。
  RNA提取试剂盒实验前的准备:
  1、预防RNase污染,应注意以下几方面:
  ①使用无RNase的塑料制品和枪头,避免交叉污染。
  ②玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4小时,塑料器皿可在0.5M的NaOH中浸泡10分钟,用水*冲洗后高压灭菌。
  ③配制溶液应使用无RNase的水。
  ④操作人员戴一次性口罩和手套,实验过程中要勤换手套。
  2、样品应避免反复冻融,否则影响RNA提取得率和质量。
  3、使用前若发现TRIzonReagent有沉淀,可置于56℃水浴几分钟,即可溶解。
  4、第一次使用前应按照试剂瓶标签说明在BufferRW2中加入无水乙醇。
  5、所有离心步骤若无特殊说明均在室温下进行,且所有操作步骤动作要迅速。
  6、若下游实验对DNA非常敏感,建议用不含RNase的DNaseI(货号:WE0213S)对RNA进行处理。