PRECEDO原代肠癌培养基

产品名称：PRECEDO原代肠癌培养基（Human intestine Carcinoma Cell Medium）
产品说明：PRECEDO原代肠癌培养基（Human intestine Carcinoma Cell Medium）是一种为促进人源肠癌原代细胞体外生长而开发的培养基。它是一种无菌的液体混合系统，含有必需和非必需的氨基酸、维生素、有机和无机化合物、激素、生长因子、微量矿物质等。培养基基于碳酸氯盐的缓冲体系，在5%CO2、37℃培养箱中平衡时，pH值为7.4。该培养基的配方可以提供一个理想人源肠癌原代细胞体外培养环境，选择性地促进体外人源肠癌原代细胞的生长。

产品优势：
(1) 培养成功率高

(2) 体外持续扩增

(3) 保持肿瘤原始病理特征

(4) 药敏结果宇临床数据接近

使用说明：
◉使用前准备
（1）预冷的DMEM/F12培养基稀释基质胶（Corning#356231）（50倍稀释，现配现用），并取适量*覆盖培养容器，在5%CO2 37℃包被培养容器底部0.5~3h，使用时弃上清。
（2）15mL无菌离心管、移液器、移液管、无菌枪头等表面75%酒精消毒后放入生物安全柜中紫外照射30 min;提前30min从4 ℃冰箱取出*培养基平衡至室温。
◉肠癌原代细胞培养
（1）至少提前半小时使用稀释后的基质胶预铺培养瓶/板，使用前吸弃基质胶，用稀释液润洗一遍。
（2）将分离并计数后的细胞悬液参考表1中细胞数量接种于培养瓶/板，补加*培养基至所需体积，轻轻摇晃混匀，75%酒精表面消毒后放置培养箱，37℃、5%CO2培养。
（3）原代细胞初次接种后2-3天内勿动（利于细胞贴壁），第一次换液建议换半液。

◉肠癌原代细胞传代
（1）镜下观察细胞形成克隆，且汇合度85~95%时即可传代。
（2）培养箱中取出细胞，弃旧培养液，0.05%yi-mei洗涤5秒后吸尽，再加入适量0.05%yi-mei，37℃孵育，2~5 min后拿出轻拍培养瓶/板侧面，显微镜下观察细胞消化情况。
（3）细胞消化至细胞变圆并开始脱落时用原代细胞终止培养基终止消化，并将细胞转移至离心管中，1500 rpm, 3min。
（4）弃上清，以1~5mL条件培养基重悬细胞，活细胞计数，将细胞悬液按适合的细胞密度接种于培养瓶/板，（不同规格培养瓶/板底面积、接种原代细胞数量、添加滋养细胞数量如表1所示），补加培养基至所需体积，十字交叉混匀，培养容器75%表面消毒后置37℃、5%CO2培养箱培养。其他步骤同上。
注意事项：

（1）本产品在使用前需平衡至室温。

（2）使用产品时应注意无菌操作，避免污染。

（3）本产品中不含血清，含有原代细胞专用抗生素，如无特别需要不用额外再添加血清和双抗，可直接使用。

（4）样本需为肿瘤组织，且肿瘤细胞比例越高（>50%），培养成功率越高。

（5）为保持本产品的理想使用效果，不宜将其过夜放置于室温或较高的温度环境中。

（6）请于保质期内使用本产品，超出保质期，必须放弃使用。

（7）传代消化时切记不要消化过度，不宜超过5min，对细胞造成损伤，影响细胞状态。

（8）本产品仅用于科研用途，不能用于体外诊断。