培养基特点:
SIM SF 培养基为澄清淡黄色透明液体,如果一旦发现培养基变得浑浊或出现沉淀,请勿使用。
保存条件:
2~8℃避光保存,一旦过期,请勿使用。
稳定性及保质期:
室温下一个星期内稳定。
自收到之日起, 2~8℃避光保存,六个月内稳定。
细胞冻存:
选择处于对数生长期的细胞,保证活率大于90%。
制备细胞冻存液:45%新鲜培养基,45%条件培养基,10%DMSO。
200g离心5分钟,弃去上清。
用细胞冻存液重悬细胞,细胞冻存密度为1.2~2×107/ml/ml。
迅速转移重悬的细胞至无菌的冻存管中,每管1~2ml。
将冻存管放入程序降温盒中,-70℃冰箱放置过夜。
若冻存细胞需要长期保存,将其转移至液氮罐中。
细胞复苏:
将冻存管迅速转移至27℃水浴中,进行融化。
将融化的细胞转至无菌的含5-10ml新鲜培养基的无菌离心管中。
200g低速离心5分钟,缓慢倒掉上部培养基,不要将沉降的细胞悬起。
用10-20ml新鲜培养基重悬细胞,确保重悬后的细胞密度大于1×106/ml左右。
将重悬的细胞放入无菌培养瓶中,旋盖拧松,放在摇床中悬浮培养。
当细胞密度生长达到2~4×106/ml时,可以进行传代,传代时细胞接种密度为0.8-1×106/ml。