如何处理PCR反应中的污染？

PCR反应的特点是具有较大扩增能力与灵敏性，但令人头痛的问题是易污染，极其微量的污染即可造成假阳性的产生。那么我们该如何处理PCR反应中的污染呢？让我们一起来看看吧！一、环境污染1.稀酸处理法：对可疑器具用1mol/L盐酸擦拭或浸泡，使残余DNA脱嘌呤。2.紫外照射（UV）法：紫外波长（nm）一般选择254/300nm,照射30min即可。需要注意的是，选择UV作为消除残留PCR产物污染时，要考虑PCR产物的长度与产物序列中碱基的分布，UV照射仅对500bp以上长片段有效，对...

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磁珠法核酸提取过程中的常见误区有哪些？

磁珠法核酸提取是传统DNA提取方法wu法比拟的，那么在磁珠法核酸提取过程中的常见误区有哪些呢？让我们一起来看看吧！一、磁珠越多，提取效果越好磁珠的主要特点是既可以分散于液体中，也可以在外加磁场作用下以固态方式和液相分li任何试剂体系，磁珠和液体的比例都应该是有一定阈值的，超过一定的比例，过多的磁珠将因为无法均匀分散于液体中，而丧失其分散的特性，也使得洗涤过程中无法充分增加核酸磁珠和液体接触的效率。而过量的磁珠也会吸附更多的杂质，对于除杂的效果影响非常大。甚至有些时候，过多的磁...

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蛋白质提纯的注意事项和常见问题有什么？

在进行任何一种蛋白质纯化的时候，都要时刻注意维护它的稳定性，保护它的活性，那么你知道蛋白质提纯的注意事项和常见问题有什么吗？让我们一起来看看吧！一、注意事项：1、操作尽可能置于冰上或者在冷库内进行。2、浓度不要太稀，蛋白浓度维持在μg/mL～mg/mL。3、选择合适的pH，除非是进行聚焦层析，所使用的缓冲溶液pH避免与pI相同，防止蛋白质的沉淀。4、使用蛋白酶抑制剂，防止蛋白酶对目标蛋白的降解；在纯化细胞中的蛋白质时，加入DNA酶，降解DNA，防止DNA对蛋白的污染。5、避免...

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你知道WB实验操作步骤有哪几步吗？

蛋白质印迹(Westernblotting)：又称为免疫印迹，根据抗原抗体的特异性结合，半定量检测样品中的某种蛋白的方法。基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析条带的位置和条带深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况。那么你知道WB实验操作步骤有哪几步吗？让我们一起来看看吧！一、样本制备蛋白提取1.前期准备：首先要了解你所研究蛋白的内源表达水平，常用的数据库如Uniport、Atlas、BioGPS，或查阅相关文献。设置阳性对照...

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细胞培养基的灭菌及储存方法有哪些？

不同的培养基由于其营养成份不同，灭菌方式和储存方法也可能不同。那么细胞培养基的灭菌及储存方法有哪些呢？让我们一起来看看吧！一、不同细胞培养基的除菌方式及注意事项某些培养基（如MEM）可进行高压灭菌，这类培养基一般不含有L-谷氨酰胺和碳酸氢钠，一般是在培养基高压灭菌后才加入。另外可用耐高压的谷氨酸盐（如L-丙氨酰-L-谷氨酰胺）代替L-谷氨酰胺。可高压灭菌的培养基在121℃、15psi，15分钟的条件下wan全可达到灭菌效果及营养成分的最小损失，不需将灭菌时间延长。绝大多数细胞...

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