WB实验中的蛋白酶抑制剂

一、WB实验中的蛋白酶抑制剂作用WB实验中的蛋白酶抑制剂主要是在蛋白质提取过程中，防止蛋白质水解，从而保持蛋白质的完整性。在蛋白质纯化、提取过程中常受到其本身存在的水解酶的影响。在提取蛋白质的过程中细胞破碎释放出蛋白酶，这些酶在与欲提取的蛋白质接触时，一旦条件适宜，就会发生反应，导致蛋白质分解。二、WB实验中的蛋白酶抑制剂的作用原理蛋白酶抑制剂（proteaseinhibitor）从广义上指与蛋白酶分子活性中心上的一些基团结合，使蛋白酶活力下降，甚至消失，但不使酶蛋白变性的物...

查看更多

蛋白Marker的分类

在WesternBlot实验中，蛋白Marker的作用就像是参照标尺，用于目标蛋白分子量大小的确定、蛋白分离成功与否的判断等。因此，选择合适的蛋白Marker，对实验来说至关重要，那你知道蛋白Marker的分类是如何划分的吗？让我们一起来看看吧！一、非预染蛋白Marker非预染蛋白Marker是几种已知分子量并纯化好的蛋白质预混液，方便不同大小的蛋白比较。其条带在结合染料时，分子量不会改变，可准确评估SDS-PAGE的蛋白样品分子量。非预染蛋白Marker在电泳过程中看不到，...

查看更多

细胞复苏的小Tips

一、细胞复苏的原理细胞复苏的原理是基于将细胞从液氮或-80℃冰箱中快速取出并使其恢复活力的技术。遵循“快融”原则，短时间内融化胞外结晶，避免缓慢融化导致水分渗入胞内形成胞内再结晶损伤细胞，融化越快，细胞损伤越小。二、细胞复苏的小Tips1.为防止冻存管在水浴锅中升温时突然爆炸，可以在放入水浴锅前先在生物安全柜中把盖子拧松一下然后再拧上。2.从液氮罐里拿出细胞不必急于放入水浴锅中，因为细胞从液氮的-196℃上升到-80℃这个过程对细胞是没有损害的，我们有足够的时间处理。但是，一...

查看更多

免疫组化（IHC）SP法，原来如此简单！

免疫组化，是应用免疫学基本原理-抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及相对定量的研究，称为免疫组织化学技术或免疫细胞化学技术。一、SP法步骤1.SP三步法脱蜡→梯度水化→灭活内源性过氧化物酶→抗原修复→封闭→一抗孵育→二抗孵育→SP反应→DAB显色→苏木素复染→常规脱水→透明→封片2、免疫组化的关键环节①脱蜡和水化②抗原修复③灭活内源性过氧化物酶和...

查看更多

WB-考马斯亮蓝染色法

一、考马斯亮蓝结构考马斯亮蓝R-250和G-250染料是二磺酸化三苯基甲烷化合物的两种化学形式，结构上R-250比G-250少了2个甲基。二、蛋白质染料要求用染料和生物大分子结合形成有色的复合物是电泳后检测常用的方法。选用染料通常应考虑以下要求：1.必须与大分子结合以形成一个不溶性的，有色的，紧密的复合物，但不结合到凝胶中和支持膜上，以便从凝胶中除去，否则高背景会影响蛋白带的辨别和定量扫描。2.染料必须容易溶解在对大分子没有影响的溶剂中，以利于背景的脱色。3.选用高吸光系数的...

查看更多