NGS测序之文库构建

由于二代测序读长的限制，不可能一下将一个很长的基因序列测通，因此需要先将长基因序列随机片段化成小片段，这样的话，这些片段就可以覆盖整个基因组。所以需要构建文库。一、文库构建的步骤文库构建大致步骤类似，但是各有各自du特的点，例如，RNAseq里miRNA，lncRNA，mRNA方法各有差异，具体方法以后有机会再补充。这里以Illumina的PE文库为例，其流程图如下图。二、文库构建详细步骤（1）DNA片段化（FragmentDNA）使用超声、酶或者加热的方式将DNA样品打碎成...

查看更多

NGS测序为什么需要文库构建?

NGS即Next-generationsequencing，又叫第二代测序技术或者高通量测序技术或者下一代测序技术。文库是DNA/RNA样本在测序前做的一系列准备，因为原始的核酸样本无法直接用于测序，只有经过处理的样本才能满足测序平台的要求，比如在DNA样本两端添加测序bi备的接头；样本量不足时，可以通过PCR扩增达到上机的要求等。NGS测序为什么需要文库构建?让我们一起来看看吧！一、DNA文库构建的内容（1）片段化及末端修复（2）加接头（3）PCR注意：此处忽略磁珠纯化的步...

查看更多

冻存细胞后续如何处理？

冻存细胞在收到货后，后续如何进行处理呢？如何复苏呢？一文让你了解清楚！一、收到冻存细胞如何处理收到冻存细胞后，请打开包装箱，检查箱内干冰是否充足，冻存管是否融化，若已经融化，请拍照留存，并联系客服，若无异常，请及时将冻存管置于超低温冰箱内保存，若长时间不使用，必须在超低温冰箱内过夜后转移至液氮中保存。二、冻存细胞如何复苏取100mm培养皿并做好标记，加入预热好的12ml完quan培养基，将冻存管放入37℃水浴锅中，轻轻摇晃冻存管，待细胞悬液完quan溶解后，转移至安全柜中操作...

查看更多

细胞稳定转染和瞬时转染有哪些区别？

在细胞实验中，细胞转染是一项常用的技术，用于引入外源基因、表达蛋白或沉默目标基因等。其中，细胞的稳定转染和瞬时转染是两种常见的转染方式。细胞稳定转染和瞬时转染有哪些区别？让我们一起来看看吧！类别特点适用范围稳定转染长期稳定表达目标基因长期功能研究和稳定表达需求的实验可通过筛选和扩增获得稳定表达的细胞系长期细胞培养和细胞系建立使用脂质体、病毒载体或DNA转染等方法大规模蛋白表达和基因敲入研究瞬时转染快速实现临时的基因表达短期功能研究和临时表达需求的实验无需筛选和扩增细胞系短期细...

查看更多

封闭液有哪几种？怎么选？

完整的Western实验过程比较长，经常会出现没有结果，或者是显色后背景高了，背景高，目的蛋白颜色对比不明显，要么看不清，图片展示不理想，更别说进行数据分析了。显色背景高的原因有很多:封闭问题，洗脱问题，一抗二抗问题等。其中最xian著的就是封闭问题。最常见的封闭就是脱脂奶粉和牛血清白蛋白（BSA），当然还有血清，鱼皮明胶，聚乙烯吡咯烷酮，封闭液。我们到底应该选择哪种封闭液？怎么选择呢？让我们一起来看看不同的封闭液的优缺点吧！一、脱脂奶粉最pian宜而且最好买的封闭剂就属脱脂...

查看更多