蛋白Marker的分类

在WesternBlot实验中，蛋白Marker的作用就像是参照标尺，用于目标蛋白分子量大小的确定、蛋白分离成功与否的判断等。因此，选择合适的蛋白Marker，对实验来说至关重要，那你知道蛋白Marker的分类是如何划分的吗？让我们一起来看看吧！一、非预染蛋白Marker非预染蛋白Marker是几种已知分子量并纯化好的蛋白质预混液，方便不同大小的蛋白比较。其条带在结合染料时，分子量不会改变，可准确评估SDS-PAGE的蛋白样品分子量。非预染蛋白Marker在电泳过程中看不到，...

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细胞复苏的小Tips

一、细胞复苏的原理细胞复苏的原理是基于将细胞从液氮或-80℃冰箱中快速取出并使其恢复活力的技术。遵循“快融”原则，短时间内融化胞外结晶，避免缓慢融化导致水分渗入胞内形成胞内再结晶损伤细胞，融化越快，细胞损伤越小。二、细胞复苏的小Tips1.为防止冻存管在水浴锅中升温时突然爆炸，可以在放入水浴锅前先在生物安全柜中把盖子拧松一下然后再拧上。2.从液氮罐里拿出细胞不必急于放入水浴锅中，因为细胞从液氮的-196℃上升到-80℃这个过程对细胞是没有损害的，我们有足够的时间处理。但是，一...

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免疫组化（IHC）SP法，原来如此简单！

免疫组化，是应用免疫学基本原理-抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及相对定量的研究，称为免疫组织化学技术或免疫细胞化学技术。一、SP法步骤1.SP三步法脱蜡→梯度水化→灭活内源性过氧化物酶→抗原修复→封闭→一抗孵育→二抗孵育→SP反应→DAB显色→苏木素复染→常规脱水→透明→封片2、免疫组化的关键环节①脱蜡和水化②抗原修复③灭活内源性过氧化物酶和...

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WB-考马斯亮蓝染色法

一、考马斯亮蓝结构考马斯亮蓝R-250和G-250染料是二磺酸化三苯基甲烷化合物的两种化学形式，结构上R-250比G-250少了2个甲基。二、蛋白质染料要求用染料和生物大分子结合形成有色的复合物是电泳后检测常用的方法。选用染料通常应考虑以下要求：1.必须与大分子结合以形成一个不溶性的，有色的，紧密的复合物，但不结合到凝胶中和支持膜上，以便从凝胶中除去，否则高背景会影响蛋白带的辨别和定量扫描。2.染料必须容易溶解在对大分子没有影响的溶剂中，以利于背景的脱色。3.选用高吸光系数的...

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细胞冻存的小Tips

细胞冻存是细胞培养中的关键环节，直接影响细胞存活率和活力，关系到后续细胞实验能否按照计划有效地进行。掌握好细胞冻存的小Tips，有助您做好细胞培养式样，让我们一起来看看吧！一、细胞冻存的基本原则细胞冻存遵循“慢冻”原则：让细胞在超低温环境中缓慢进入“冬眠”状态，暂时停止其代谢活动。目的是保存细胞样本，方便复苏。二、细胞冻存的注意事项1.温度控制不稳定可能导致细胞存活率降低二甲基亚砜（DMSO）或甘油常作为冷冻保护剂，保护细胞。DMSO能快速穿透细胞膜进入细胞，降低冰点，延缓冻...

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