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原代食管癌条件重编程培养基

简要描述:原代食管癌条件重编程培养基(Human Esophagus Carcinoma Conditional Reprogramming Medium)是一种为促进食管鳞癌原代细胞体外生长而设计的培养基。

  • 产品型号:型号齐全
  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2022-06-24
  • 访  问  量:60
详情介绍

产品名称原代食管癌条件重编程培养基(Human Esophagus Carcinoma Conditional Reprogramming Medium)
产品说明原代食管癌条件重编程培养基(Human Esophagus Carcinoma Conditional Reprogramming Medium)是一种为促进食管鳞癌原代细胞体外生长而设计的培养基。它是一种无菌的液体混合系统,含有必需和非必需的氨基酸、维生素、有机和无机化合物、激素、生长因子、微量矿物质等。该培养基产品基于碳酸氢盐的缓冲体系,在5%CO2/95%空气的培养箱中平衡时,pH值为7.4。该培养基的配方可以提供一个最佳平衡的营养环境,选择性地促进体外人食管鳞癌原代细胞的生长。

产品优势
(1) 培养成功率高

(2) 体外持续扩增

(3) 保持肿瘤原始病理特征

(4) 药敏结果宇临床数据接近

使用说明
使用前准备
(1)y射线照射过的NIH-3T3细胞(40Gy辐照)。
(2)15mL无菌离心管、移液器、移液管、无菌枪头等表面消毒后放入超净工作台中紫外照射30min。提前30min从4℃冰箱取出原代细胞培养基平衡至室温。
食管癌原代细胞培养
(1)初次分离的食管癌小样本细胞悬液一般无需计数,直接种入12孔板中。
(2)食管癌术中样本过70微米筛网后计数,按照表1中细胞数接种在合适的培养器皿中,加入y射线辐照后的NIH-3T3细胞(添加滋养细胞数量如表1和表2所示)。
(3)原代细胞初次接种后2-3天勿动(利于细胞贴壁),培养过程中若培养基颜色变黄但细胞未长满时可换半液,镜下观察细胞未长满但3T3细胞已不足时,适量补充γ射线辐照后的3T3细胞(一般补加初始数目的一半)。

注∶针对实体瘤样本,细胞粒径大于10微米进行计数;倍增时间>48小时则定义为增殖较慢的细胞;对于增殖较快细胞,可以综合倍增时间、接种器皿的规格以及培养周期来估算接种的细胞数量;表格供参考,具体实验具体对待。
食管癌原代细胞传代
(1) 镜下观察细胞形成克隆,且汇合度达到80~90%时即可传代。
(2) 培养箱中取出细胞,弃旧培养液,0.25%胰酶洗涤30秒后吸尽,再加入适量0.05%胰酶,37℃孵育,5 min后拿出轻拍培养瓶/板侧面,显微镜下观察细胞消化情况。
(3) 细胞消化至细胞变圆并开始脱落时用终止培养基终止消化,并将细胞转移至离心管中,1500rpm离心3 min。
(4) 弃上清,以1-2mL相对应的原代细胞培养基重悬细胞,活细胞计数,将细胞悬液按适合的细胞密度接种于培养瓶/板,加入y射线辐照后的NIH-3T3细胞(不同规格培养瓶/板底面积、接种原代细胞数量、添加滋养细胞数量如表1或表2所示)。
(5) 补加原代细胞培养基至所需体积,轻轻摇晃混匀,表面消毒后置培养箱,37℃、5%CO2条件培养。

注意事项:

1.本产品在使用前需平衡至室温。
2.本产品中含有胎牛血清和原代细胞专用抗生素,如无特别需要不用额外再添加血清和双抗,可直接使用。
3.为保持本产品的最佳使用效果,不宜将其过夜放置于室温或较高的温度环境中。
4.请于保质期内使用本产品,超出保质期,必须放弃使用。
5.原代细胞初次接种时会贴壁较慢和贴壁不牢,若无必要,尽量减少取出观察的次数,建议2-3天一次。
6.传代消化时切记不要消化过度,对细胞造成损伤,影响细胞状态。
7.接种细胞时注意细胞密度,不可过稀或过密。
8.样本需为食管鳞癌术中或内镜样本,且肿瘤细胞比例越高(至少>50%),培养成功率越高,不推荐用于少量样本(如循环肿瘤细胞)的培养。
9.使用产品时应注意无菌操作,避免污染。
10.本产品仅用于科研用途,不能用于体外诊断。


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