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样本种类繁多且复杂,有些样本,要想提取到质量良好的RNA是非常困难的,那么该如何确认RNA的质量呢?让我们一起来看看吧!确认RNA的质量有以下两种常见方法1)检测RNA溶液的吸光度280、320、230、260nm下的吸光度分别代表了核酸、背景(溶液浑浊度)、盐浓度和蛋白等有机物的值。一般的,我们只看OD260/OD280(Ratio,R)。1.82.0时,我们认为RNA中蛋白或者时其他有机物的污染是可以容忍的,不过要注意,当你用Tris作为缓冲液检测吸光度时,R值可能会大于...
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分子生物学实验中经常需要对样本进行浓度和纯度的测定,它相当于一种质控,以此来确保下游实验的结果可靠。那么该如何提高DNA纯度测定的准确性呢?让我们一起来看看吧!常用的DNA浓度/纯度测定设备是紫外分光光度计,它的原理是利用物质分子对紫外可见光谱区的辐射吸收来进行分析物质成分。假设现在有一样物质A,它溶解在溶液内,当光照射溶液时,溶液内的A会吸收一部分的光。不同颜色的光有不同的波长,A对不同颜色的光(不同波长)的吸收程度是不一样的。双链的DNA,它能对波长为260nm的光进行强...
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不同组织RNA提取原理是将细胞裂解,释放出RNA,并通过不同方式去除蛋白,DNA等杂质,最终获得高纯度RNA产物的过程。那么你知道常见的RNA提取方法有什么吗?让我们一起来看看吧!一、酚氯仿抽提(有机试剂抽提)原理:将被裂解的生物样本,混匀离心分相以后,RNA在上层水相,DNA,蛋白质在中间层,下层有机相。收集水相加入乙醇或异丙醇可沉淀RNA,漂洗后得到RNA。优点:得率高、可提取到含miRNA和其他小RNA在内的总RNA。缺点:用到苯酚、氯仿等有毒试剂。二、硅胶柱法抽提原理...
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实验室工作中,经常会需要用到纯化的DNA,这时我们通常需要使用一个商业的DNA提取试剂盒对目的DNA进行分离纯化。那么我们该如何选择合适的DNA提取试剂盒呢?让我们一起来看看吧!一、试剂盒组分目前大多数DNA提取试剂盒遵循相同的基本步骤:裂解,柱纯化,洗涤杂质,柱洗脱。然而,不同的盒子在完成每个步骤的方式上有很大的不同。二、使用的样本类型不同的DNA来源有不同的试剂盒,从实验室培养的细胞,到临床样本,土壤样本,甚至指纹,也有许多专门用于某些应用的试剂盒。例如,土壤中的腐殖酸或...
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如今,大多数实验室都使用商业DNA提取试剂盒,这些试剂盒使用硅胶自旋过滤法来获得高质量的DNA。这些可以快速有效地纯化DNA(或RNA)。那么DNA提取试剂盒的原理是什么呢?让我们一起来看看吧!一、RNA和DNA提取裂解:裂解公式可能因您要提取DNA还是RNA而异,但共同点是含有高浓度离液盐的裂解缓冲液。Chaotropes(离液剂)的作用:Chaotrope会破坏氢键及疏水间的相互作用。离液盐包括盐酸胍、硫氰酸胍、尿素和高氯酸锂。洗涤剂:除了离液剂外,裂解缓冲液中通常还有一...
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