产品名称:PRECEDO原代肺癌类器官培养基(Human Lung Carcinoma Cell Medium)
产品说明:PRECEDO原代肺癌类器官培养基(Human Lung Carcinoma Cell Medium)是一种为促进肺癌原代细胞体外生长而设计的培养基。它是一种无菌的液体混合系统,含有必需和非必需的氨基酸、维生素、有机和无机化合物、激素、生长因子、微量矿物质等。培养基基于碳酸氢盐的缓冲体系,在5%CO2/95%空气的培养箱中平衡时,pH值为7.4。该培养基的配方可以提供一个理想平衡的营养环境,选择性地促进体外人肺癌原代细胞的生长。
产品优势:
(1) 培养成功率高
(2) 体外持续扩增
(3) 保持肿瘤原始病理特征
(4) 药敏结果宇临床数据接近
使用说明:
◉使用前准备
(1)DMEM/F12培养基稀释后的基质胶(Corning#356231)(100倍稀释,现配现用)。
(2)15mL无菌离心管、移液器、移液管、无菌枪头等表面消毒后放入超净工作台中紫外照射30min。
(3)提前30min从4 ℃冰箱取出*培养基平衡至室温。
◉肺癌原代细胞培养
(1)至少提前半小时使用稀释后的基质胶预铺培养瓶/板,使用前吸干基质胶,用稀释液润洗一遍。
(2)将分离并计数后的细胞悬液参考表1中细胞数量接种于培养瓶/板,补加*培养基至所需体积,轻轻摇晃混匀,表面消毒后置培养箱,37℃、5% CO2条件培养。
(3)原代细胞初次接种后2-3天内勿动(利于细胞贴壁),第一次换液建议换半液。
◉肺癌原代细胞传代
(1)镜下观察细胞形成克隆,且汇合度达到80~90%时即可传代。
(2)培养箱中取出细胞,弃旧培养液,加入适量0.05%胰mei,37℃孵育,5min后拿出轻拍培养瓶/板侧面,显微镜下观察细胞消化情况;细胞消化至细胞变圆并开始脱落时用终止培养基终止消化,并将细胞转移至离心管中,1500rpm离心3min。
(3)弃上清,以1-2mL*培养基重悬细胞,活细胞计数,将细胞悬液按适合的细胞密度接种于培养瓶/板,补加*培养基至所需体积,轻轻摇晃混匀,表面消毒后置培养箱,37℃、5% CO2条件培养。其他步骤同上。
注意事项:
本产品在使用前需平衡至室温。
使用产品时应注意无菌操作,避免污染。
本产品中不含血清,含原代细胞专用抗生素,无需额外添加抗生素。
为保持本产品的理想使用效果,不宜将其过夜放置于室温或较高的温度环境中。
样本需为肺癌术中样本,且肿瘤细胞比例越高(至少>50%),培养成功率越高,不推荐用于少量样本(如穿刺或者循环肿瘤细胞)的培养。
请于保质期内使用本产品,超出保质期,必须放弃使用。
本产品仅用于科研用途,不能用于体外诊断。