免疫荧光实验的步骤有哪些？

免疫荧光（IF）是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项检测技术。可用于检测和识别细胞和组织中蛋白质及其他分子的亚细胞分布和迁移。那么你知道免疫荧光实验的步骤有哪些吗？让我们一起来看看吧！一、细胞准备对于单层生长的细胞，将细胞接种到预先处理过的盖玻片的培养皿中，待细胞接近长成单层后取出盖玻片，用PBS洗涤两次。对于悬浮生长的细胞，取对数生长的细胞，用PBS离心洗涤（1000rpm,5min）两次，然后用细胞离心甩片机制备细胞片或直接制备细胞涂片。二、固定根据需要...

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细胞瞬时转染的原理

哺乳动物细胞瞬时转染能在短期内快速表达高活性蛋白而被广泛应用。那么细胞瞬时转染的原理是什么？让我们一起来看看吧！哺乳动物细胞自身具有蛋白折叠和翻译后修饰的功能，获得的蛋白更具有天然活性。哺乳动物细胞生产蛋白的方式有两种：瞬时转染和稳定转染。瞬时转染的特点是短期快速表达，满足蛋白的小量制备。而稳定转染通过构建稳定细胞系能够满足蛋白的大量、长期生产。瞬时转染的原理是指将构建好的质粒通过某种方式导入到哺乳动物细胞内，该质粒上的外源基因不整合到细胞自身的基因组上。随着细胞的生长分裂，...

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ELISA主要材料试剂有哪些？

酶联免疫吸附测定（enzymelinkedimmunosorbentassay，简写ELISA或ELASA）指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体特异性结合进行免疫反应的定性和定量检测方法。那么ELISA主要材料试剂有哪些呢？让我们一起来看看吧！一、抗原和抗体在ELISA实施过程中，抗原和抗体的质量决定实验是否成功的关键因素。本法要求所用抗原纯度高，抗体效价高、亲和力强。ELISA所用抗原有三个来源：天然抗原、重组抗原和合成多肽抗原。天然抗原取材于动物...

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ELISA的常见问题有哪些？解决方法是什么？

酶联免疫吸附测定（enzymelinkedimmunosorbentassay，简写ELISA或ELASA）指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体特异性结合进行免疫反应的定性和定量检测方法。那么你知道ELISA的常见问题有哪些？解决方法是什么吗？让我们一起来看看吧！一、高背景或阴性对照只偏高原因：1.阴性对照孔被阳性对照货样品污染2.抗体非特异性结合3.酶结合物过浓4.孵育温度过高解决方法：1.洗涤是，勿将洗液溢出孔外2.封闭液不合适，更换封闭液3.请...

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PCR引物设计的关键点有哪些？

PCR引物是人工合成的一段寡聚核苷酸。引物是PCR特异性反应的关键，因此，PCR的首要任务就是引物设计。那么你知道PCR引物设计的关键点有哪些吗？让我们一起来看看吧！一、引物最好在模板cDNA的保守区内设计DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。在NCBI上搜索不同物种的同一基因，通过序列分析软件（比如DNAman）比对（Alignment），各基因相同的序列就是该基因的保守区。二、引物长度一般在15~30碱基之间引物长度（primerlength）常用的是18-...

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