什么是文库构建？

基于NGS测序的诸多优点，故此技术在全球测序市场上占有着绝对的优势位置，而新一代测序（NGS）文库制备是一体化测序流程中的一个关键因素，那么什么是文库构建呢？让我们一起来看看吧！基因文库是储存了某种生物的DNA片段的受体菌的集合体。文库分为储存全部DNA片段和部分DNA片段，前者叫基因组文库，后者包括cDNA文库。文库构建的基础是将目标RNA或DNA制备成可以和测序仪器兼容的形式。从组织或者细胞中将DNA或RNA提取出来，并通过机械破碎或者是酶切法对其进行片段化。如果前面提取...

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不同动物细胞或组织的蛋白质抽提步骤是怎样的？

你知道不同动物细胞或组织的蛋白质抽提步骤是怎样的吗？让我们一起来看看吧！一、培养的贴壁动物细胞的蛋白质抽提步骤1.从贴壁细胞培养瓶中小心倾去培养液。2.预冷的PBS清洗贴壁的细胞2次，小心倾去PBS。3.配置含抑制剂的蛋白质抽提试剂（1ml抽提试剂中加入5μl蛋白酶抑制剂混合液，5μlPMSF和5μl磷酸酶混合液）。4.细胞瓶中加入预冷的含抑制剂的蛋白质抽提试剂（107个细胞中加入1ml抽提试剂；5×106个细胞中加入0.5ml抽提试剂），轻轻摇动5分钟。5.用一预冷的橡胶和...

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质粒构建实验影响因素有哪些？

质粒构建是指选定的目的外源基因（DNA）先要经过PCR扩增。随后用限制性内切酶分别切割载体和外源DNA片段，再使用DNA连接酶将切割后的载体与DNA片段连接，转入宿主细胞。最后经过筛选鉴定出正确的重组克隆质粒，实现目的基因在宿主细胞内的正确表达。那么质粒构建实验影响因素有哪些呢？让我们一起来看看吧！一、载体的选择在选择克隆载体时应注意以下几点：①具有自主复制能力，拷贝数高；②携带易于筛选的选择标记；③含有多种限制酶的单一识别序列，以供外源基因插入；④载体应尽可能小（＜15kb...

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影响荧光原位杂交实验的因素有哪些？

荧光原位杂交是一门新兴的分子细胞遗传学技术，是20世纪80年代末期在原有的放射性原位杂交技术的基础上发展起来的一种非放射性原位杂交技术。那么影响荧光原位杂交实验的因素有哪些呢？让我们一起来看看吧！一、固定液的选择及固定时间①石蜡组织建议用10%中性缓冲福尔马林固定12～48h，其它固定液对实验结果可能产生一定的影响。②组织标本离体后应尽快固定，较大标本切开固定。如样本固定不及时，荧光信号会减弱。（尤其环境温度较高时更应及时固定）③固定液体积应不少于标本体积的10倍，否则固定不...

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流式细胞周期检测的常见问题有哪些？

你知道流式细胞周期检测的常见问题有哪些吗？让我们一起来看看吧！一、样本制备注意事项1.根据不同的检测细胞调整合适的温度、湿度、酸碱度等培养环境，注意一定要无菌的环境培养。2.培养细胞时，以对数期处理为宜，避免细胞量过少导致收集细胞量不足或者细胞量过多导致细胞开始大量死亡造成的实验误差。3.流式检测细胞周期上机检测所需收集细胞量较多，收集细胞时尽量多收集一些4.流式检测对细胞离心，重悬次数较多，注意动作轻缓，避免过多地损伤、弄破细胞。5.本实验对细胞离心，重悬次数较多，注意动作...

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