蛋白质提纯的注意事项和常见问题有什么？

在进行任何一种蛋白质纯化的时候，都要时刻注意维护它的稳定性，保护它的活性，那么你知道蛋白质提纯的注意事项和常见问题有什么吗？让我们一起来看看吧！一、注意事项：1、操作尽可能置于冰上或者在冷库内进行。2、浓度不要太稀，蛋白浓度维持在μg/mL～mg/mL。3、选择合适的pH，除非是进行聚焦层析，所使用的缓冲溶液pH避免与pI相同，防止蛋白质的沉淀。4、使用蛋白酶抑制剂，防止蛋白酶对目标蛋白的降解；在纯化细胞中的蛋白质时，加入DNA酶，降解DNA，防止DNA对蛋白的污染。5、避免...

查看更多

你知道WB实验操作步骤有哪几步吗？

蛋白质印迹(Westernblotting)：又称为免疫印迹，根据抗原抗体的特异性结合，半定量检测样品中的某种蛋白的方法。基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析条带的位置和条带深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况。那么你知道WB实验操作步骤有哪几步吗？让我们一起来看看吧！一、样本制备蛋白提取1.前期准备：首先要了解你所研究蛋白的内源表达水平，常用的数据库如Uniport、Atlas、BioGPS，或查阅相关文献。设置阳性对照...

查看更多

细胞培养基的灭菌及储存方法有哪些？

不同的培养基由于其营养成份不同，灭菌方式和储存方法也可能不同。那么细胞培养基的灭菌及储存方法有哪些呢？让我们一起来看看吧！一、不同细胞培养基的除菌方式及注意事项某些培养基（如MEM）可进行高压灭菌，这类培养基一般不含有L-谷氨酰胺和碳酸氢钠，一般是在培养基高压灭菌后才加入。另外可用耐高压的谷氨酸盐（如L-丙氨酰-L-谷氨酰胺）代替L-谷氨酰胺。可高压灭菌的培养基在121℃、15psi，15分钟的条件下wan全可达到灭菌效果及营养成分的最小损失，不需将灭菌时间延长。绝大多数细胞...

查看更多

细胞培养基的理化性质有什么？

动物细胞在细胞培养基中不仅能存活，还要分裂增殖，合适的渗透压、pH值等理化性质是细胞培养基必须具备的前提条件。那么细胞培养基的理化性质有什么呢？让我们一起来看看吧！一、pH动物细胞大多数需要轻微的碱性条件，适宜pH在7.2～7.4之间。细胞培养基的pH值通常需经校正的pH计来测定。在细胞生长过程中，随细胞数量的增多和代谢活动的加强，二氧化碳不断被释放，培养液变酸，pH值发生变化。酚红是细胞培养基中常用的pH指示剂，但依靠细胞培养基中的酚红等pH指示剂进行判断，需要实验员的经验...

查看更多

细胞的处理与采集方法是什么？

采集方法和处理是获取细胞来源后的关键步骤，它们直接影响到细胞的质量和活力。那么你知道细胞的处理与采集方法是什么吗？让我们一起来看看吧！一、采集方法：1.骨髓穿刺：通过骨髓穿刺针将针头插入骨髓腔，通常在骨盆骨骼或胸骨等部位进行。这种方法适用于骨髓来源的细胞，如造血干细胞。2.外周血采集：通过外周静脉或动脉采集患者的整个血液。这种方法适用于外周血来源的细胞，如外周血造血干细胞。3.脂肪抽取：通过脂肪组织的吸取来获取脂肪来源的细胞，如脂肪干细胞。这种方法通常使用吸脂器来抽取脂肪组织...

查看更多